小鵝瘟（Ｇｏｓｌｉｎｇ?。穑欤幔纾酰?，ＧＰ）是由小鵝瘟病毒或稱鵝細小病毒（Ｇｏｏｓｅ?。校欤幔纾酰濉。觯椋颍酰蠡颍牵铮铮螅濉。校幔颍觯铮觯椋颍酰?，ＧＰＶ）引起的主要侵害３０日齡以內雛鵝和雛番鴨的一種急性接觸性傳染病。該病以急性腸炎及肝、腎、心實質臟器敗血性病變?yōu)樘卣鳎哂休^強的傳染性和較高的死亡率，是危害和威脅養(yǎng)鵝業(yè)最重要的傳染病之一。２０１３年３月，貴州省某肉鵝飼養(yǎng)場的５日齡雛鵝患病，經臨床診斷、病理剖檢、實驗室診斷，確診為小鵝瘟。
１ 發(fā)病情況
２０１３年３月，貴州省某肉鵝飼養(yǎng)場引進３００羽雛鵝，３日齡雛鵝發(fā)病，表現為精神委頓，離群獨偶，鼻孔流出漿液性鼻液，患鵝頻頻搖頭，拉灰黃色或黃綠色稀糞，神經紊亂。至５日齡，共死亡雛鵝５８羽。
２ 流行特點
小鵝瘟在自然條件下僅感染雛鵝，潛伏期３～４ｄ，發(fā)病后數日內波及全群，死亡率最高可達１００％。最早１～４日齡開始發(fā)病，隨著日齡的增長易感性下降，２０日齡以上很少發(fā)病。本病通過污染的飼料、飲水、用具和環(huán)境經消化道傳播，也可經污染的種蛋垂直傳播。
３ 臨床癥狀
臨床癥狀可分為最急性型、急性型和亞急性型。最急性型通常發(fā)生在１周齡內的雛鵝，常無臨床癥狀突然死亡，或發(fā)現精神委頓后數小時死亡，此型傳播迅速，數小時內波及全群，致死率高達９５％～１００％。急性型病鵝離群站立，不飲不食，臨死前出現神經癥狀，頸部扭轉，兩腿麻痹，全身抽搐。亞急性型多發(fā)生于流行后期孵化出的雛鵝或１５日齡以上的雛鵝，表現為不愿走動、減食或不食、腹瀉，癥狀較輕，病程也較長。
４ 剖檢變化
病死鵝腺胃腫脹、嗉囊腫大，心外膜出血、心耳充血，肝臟暗黃，腸道栓塞（圖１）。圖１ 疑似小鵝瘟引起的器官病變
５ 實驗室診斷
５．１ 病料采集
無菌采集剛病死鵝的肝臟置冰瓶中，立即送實驗室進行診斷。
５．２ 分子生物學鑒定
５．２．１ 主要試劑：Ｔａｑ?。模危辆酆厦纲徸裕裕幔耍幔遥峁?，ＳＤＳ、蛋白酶Ｋ、ｄＮＴＰｓ、ＧｏｌｄＶｉｅｗ Ｉ型核酸染色劑、ＤＬ２０００、Ｔｒｉｓ、ＥＤＴＡ等均購自天根生化科技（北京）有限公司，苯酚、氯仿、無水乙醇等為國產試劑。
５．２．２ 模板的制備：取病變典型的雛鵝肝臟材料，按１∶５的比例加入生理鹽水研磨成組織勻漿，１０?。埃埃埃颍恚椋铍x心１０ｍｉｎ，取上清液按ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病料的ＤＮＡ。
５．２．３?。校茫覕U增：根據ＧｅｎＢａｎｋ中的小鵝瘟病毒ＶＰ３基因，應用ＤＮＡＳｔａｒ軟件，設計１對引物用于擴增小鵝瘟病毒ＶＰ３基因片段，目的基因擴增片段長度為５３６ｂｐ。
上游引物：Ｐ１：３’－ＴＡＧＣＡＴＧＴＴ?。茫牵茫裕茫粒裕裕谩。粒茫粒怠?/div>
下游引物：Ｐ２：３’－ＧＴＡＡＡＧＣＴＣＣＡＡＧＡＡ－ＣＡＴＣＣＡＧＡ－５’
５０μＬ ＰＣＲ反應體系：１０×ＰＣＲ?。拢酰妫妫澹颉。郸蹋?、ＭｇＣｌ２（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）０．５μＬ、ｄＮＴＰｓ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）１μＬ、Ｔａｑ?。模危辆酆厦福ǎ玻担眨蹋蹋宝蹋?，上、下游引物各１μＬ；ＤＮＡ模板３μＬ，用雙蒸水補足至５０μＬ。ＰＣＲ反應條件：９４℃預變性５ｍｉｎ，９４℃變性３０ｓ，５６℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，進行３５個循環(huán)后，７２℃延伸５ｍｉｎ。ＰＣＲ產物于４℃保存。ＰＣＲ擴增產物的檢測：?。甫蹋虜U增產物加到１０ｇ／Ｌ的瓊脂糖凝膠中，電壓為９０Ｖ，電流為４０～６０ｍＡ，電泳２５ｍｉｎ左右，然后在凝膠成像儀下觀察。
５．２．４?。校茫覕U增結果：以基因組ＤＮＡ為模板，小鵝瘟病毒陽性模板和病死鵝肝組織ＤＮＡ均出現５３６ｂｐ左右的單一條帶，與預期大小基本一致。
６ 分析與討論
６．１ 根據上述病死雛鵝的發(fā)病情況、臨床癥狀及分子生物學鑒定，判定該鵝場的雛鵝發(fā)生的是小鵝瘟。
６．２ 根據診斷結果，立即對該養(yǎng)鵝場的雛鵝注射小鵝瘟高免血清，并選用敏感性較高的抗菌素藥物進行治療，疫情得到有效控制。
６．３ 為預防小鵝瘟，種蛋最好在產出后立刻消毒，種蛋入孵前再進行一次消毒。采用新潔爾滅浸泡消毒法。將新潔爾滅配成１∶１?。埃埃暗乃芤海N蛋浸泡３ｍｉｎ。同時用軟布擦洗蛋殼表面后晾干。
６．４ 加強飼養(yǎng)管理，鵝場提倡自繁自養(yǎng)，外地購入的種蛋應來自免疫種鵝。購進的雛鵝應隔離飼養(yǎng)２０～２５ｄ，確認無病后才能混群。飼料中應添加多種維生素，尤其是ＶＡ，以減少角質化的發(fā)生。
（貴州省新蒲新區(qū)新舟鎮(zhèn)農業(yè)服務中心，肖學明；貴州省畜牧獸醫(yī)研究所王璇，李干洲）
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