1.1.1樣品采集2013年1—12月對湖南某豬場的大白、長白和杜洛克共15頭公豬每月進行1次精液采集留樣，用豬精液稀釋液稀釋后，滴1滴精液于載玻片的一端，用另一載玻片進行推片，自然干燥，標(biāo)記公豬耳號和采精時間，放在切片盒內(nèi)保存?zhèn)溆?。公豬舍配備濕簾降溫設(shè)施，但效果相對不理想。

     1.1.2主要儀器、試劑光學(xué)生物顯微鏡（ZEISSprimostar，德國ZEISS公司），高清數(shù)字?jǐn)z像機（MC-D310型，江西鳳凰光學(xué)集團有限公司），0.5%龍膽紫染色液。其他儀器設(shè)備及常規(guī)試劑均由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)臨床獸醫(yī)學(xué)實驗室提供。

     1.2.1精子畸形分類精子畸形一般分5類：原生質(zhì)滴，頭部異常，頸部異常，尾部異常，頂體異常。原生質(zhì)滴：位于精子頭尾交界處，是由于精子的成熟度不夠或公豬使用過度造成。頭部異常：頭部巨大、瘦小、細(xì)長、圓形、輪廓不明顯、皺縮、缺損、雙頭等。頭部畸形可能是由于細(xì)胞分化或精細(xì)胞變形過程中某些不良因素的影響而引起。頸部異常：頸部膨大、纖細(xì)、曲折、不全、雙頸等。尾部異常：彎曲、短小、缺損、雙尾等。尾部畸形與精子輸出管道如睪丸、輸精管的機能障礙有關(guān)，如附睪病變，帶原生質(zhì)滴的精子比例上升，還與處理精液的環(huán)境有關(guān)，如環(huán)境溫度過低會出現(xiàn)嚴(yán)重的卷尾現(xiàn)象，或精液在運輸過程中劇烈震蕩，出現(xiàn)較多的無尾精子。頂體異常：頂體不完全、異形。

     在生產(chǎn)實踐中，種豬的精液要經(jīng)常檢查，畸形精子的百分率應(yīng)在15％～20％。如果超過這一指標(biāo)，種豬則不能用于配種或精液廢棄。

     1.2.2精子畸形的檢測精子畸形率的測定通過涂片、染色（龍膽紫染色法）以及鏡檢等方法來確定。將采集的精液樣片用0.5%龍膽紫溶液進行染色、水洗、自然干燥，用40倍物鏡進行鏡檢，對畸形精子進行顯微照相，用計算器對不同類型的畸形精子和正常精子分別計數(shù)，記錄整塊樣片不同視野500個精子中畸形精子所占的比例。

     利用Excel進行統(tǒng)計記錄，對調(diào)查統(tǒng)計的數(shù)據(jù)利用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

     對精子涂片進行染色并利用光學(xué)顯微鏡（10×40）觀察后，按照正常精子、原生質(zhì)滴、頭部畸形、頸部畸形、尾部畸形進行分類，如圖1。

  

   

     表1所示，全年15頭公豬各月平均精子總畸形率中，8月最高，達(dá)（26.33±8.46）%，與1、2、3、6月差異顯著（P＜0.05），2月最低，為（8.39±1.02）%，與7、8月差異顯著（P＜0.05），其他各月之間差異不顯著（P＞0.05）；原生質(zhì)滴的發(fā)生率，8月最高，達(dá)（14.26±7.61）%，與1、2月差異極顯著（P＜0.01），與除9、12月外的其他各月份差異顯著（P＜0.05），2月最低，為（2.21±0.85）%，與8月份差異極顯著（P＜0.01）其他各月之間差異不顯著（P＞0.05）；尾部畸形率，7月最高，達(dá)（13.52±7.45）%，與其余11個月差異顯著（P＜0.05），其中與1、2、3以及6月差異極顯著（P＜0.01），6月最低，為（3.22±0.69）%，與7月差異極顯著（P＜0.01），與其他各月差異不顯著（P＞0.05）；頭部畸形以及頸部畸形中，各月份之間差異不顯著（P＞0.05）。

     首先，精子是在陰囊內(nèi)的睪丸產(chǎn)生的，睪丸內(nèi)動脈血溫不高于35℃，靜脈血溫更低至33℃，這樣使睪丸內(nèi)的溫度相對體腔內(nèi)的溫度要低很多，也只有在這樣的低溫環(huán)境里，精子才能正常產(chǎn)生。

     另外，睪丸溫度過高影響精子的生長，造成畸形率升高，溫度過低時也不利于精子的生長，畸形率同樣會升高。

     季節(jié)性的光周期變化會引起豬內(nèi)分泌機能產(chǎn)生規(guī)律性波動，自動地調(diào)節(jié)動物的生長過程和生殖機能。豬精液品質(zhì)的季節(jié)性差異顯然與光照強度及動物的生殖內(nèi)分泌狀態(tài)有關(guān)?，F(xiàn)存的歐洲野豬保持了夏、秋不繁育后代的特點，其繁殖活動具有明顯的季節(jié)性。雖然杜洛克、大白、長白等現(xiàn)代瘦肉型豬種經(jīng)過高度培育和馴化，但其在生殖方面仍然在一定程度上受著“季節(jié)性發(fā)情”的古老機制影響，因而表現(xiàn)為夏季的精液品質(zhì)差，尤其是精子畸形率明顯高于其他季節(jié)。豬的精子發(fā)生既有周期性又有連續(xù)性。在某一時刻，睪丸內(nèi)存在著許多分裂階段或發(fā)育狀態(tài)不同的精細(xì)胞，即它們分別處于不同的精子發(fā)生周期的某一個階段，而每一個精細(xì)胞都需歷經(jīng)44～45d的精子發(fā)生周期才能成為獨立的精子，在此過程中，不同品種在不同季節(jié)里的精液品質(zhì)差異不顯著。

     生精過程是一個十分復(fù)雜的細(xì)胞增殖和分化過程，同時精子發(fā)生受到下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)控。環(huán)境因素作用于其中任何一個環(huán)節(jié)，都可導(dǎo)致精子質(zhì)量下降，但作用部位、作用機制和作用方式尚不清楚。另外，環(huán)境因素對健康造成的影響往往由多因素聯(lián)合作用引起，但目前對于環(huán)境因素影響生殖健康的認(rèn)識遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，尚需進一步研究。月份變化中，頸部畸形的精子比例在5月份出現(xiàn)小幅度上升，該時間段氣溫相對正常，但通過對該場免疫記錄顯示，4月初5月初分別進行了口蹄疫及藍(lán)耳病疫苗的普免，公豬也在免疫群體中，通過佟敬賓對疫苗應(yīng)激的研究發(fā)現(xiàn)，該類疫苗造成的應(yīng)激會導(dǎo)致精子畸形率上升。

     在本試驗中，種公豬的精子畸形率在夏季普遍升高，顯然與高溫有關(guān)；冬季的精液品質(zhì)不如春秋季，說明寒冷對精液品質(zhì)也有較大影響，但影響的強度不及高溫大。因此，該場公豬舍做好夏季防暑降溫、冬季保溫工作是很有必要的。

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，孟晨光，蔣茹，賈歡，吳先潮，申艷輝，袁安文）