仔豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的一種急性傳染病，以腹瀉、敗血癥或毒血癥為主要特征，造成仔豬大批死亡或生長發(fā)育受阻，是危害養(yǎng)豬業(yè)的常見疫病之一。伊寧市南郊某豬場1～5日齡仔豬發(fā)生了一種以排蛋黃樣稀糞，嚴重脫水，發(fā)病率為50%，死亡率高達100%為特征的疾病，經(jīng)診斷為初生仔豬大腸桿菌病。
1流行病學調(diào)查
該種豬場位于伊犁地區(qū)伊寧市的南郊，豬場門前方正對一條公路，交通十分便利，四周為大面積的農(nóng)田。場主于2007年買下此場，其前身就為豬場，但因經(jīng)營不善而倒閉。該場現(xiàn)有生產(chǎn)母豬100多頭，其中長白條、杜洛克占三分之二，還有幾頭皮特蘭，其余為雜種豬。此場設有5個養(yǎng)殖圈，即育肥豬和育成種豬圈、保育圈、產(chǎn)房、妊娠圈及斷奶后的仔豬圈。養(yǎng)殖圈內(nèi)非工作人員禁止入內(nèi)，其衛(wèi)生條件還可以，平常無病時1周消毒1次，發(fā)病時1周消毒3次，主要用的消毒液為高錳酸鉀、過氧乙酸及一些堿性消毒液。但豬圈通風設備不良，無電風扇，圈內(nèi)的空氣質(zhì)量較差。產(chǎn)床均為鋼絲網(wǎng)床，距離地面20cm左右，其下方為糞坑。平時豬飲用地下水，飼喂正規(guī)廠家飼料。死畜一般放入化糞池內(nèi)，池內(nèi)的水從墻外的一條小渠流走。場內(nèi)無專業(yè)的獸醫(yī)人員。一旦發(fā)病，工作人員則用青霉素和鏈霉素進行治療。
2臨床癥狀及病理變化
發(fā)病仔豬普遍下痢，糞便為黃色、糊狀，精神沉郁，食欲下降，部分發(fā)病仔豬體溫達40．5～41．0℃，還有部分仔豬于發(fā)病次日出現(xiàn)昏睡、盲目運動、倒地、四肢游泳狀劃動等神經(jīng)癥狀，多于1～2d死亡。仔豬的病理變化主要集中在消化道，其空腸、回腸、結(jié)腸段黏膜水腫和充血，腸管充滿黃色糊狀內(nèi)容物，并伴有鼓氣。腸系膜淋巴結(jié)腫脹、充血，尸體消瘦、失水。肝臟、脾臟、肺臟及心臟并無異常變化。
3實驗室診斷
3．1材料
3．1．1試驗動物清潔系小白鼠，體重為18g左右，購自新疆醫(yī)科大學。
3．1．2主要試劑麥康凱瓊脂平板、鮮血培養(yǎng)基、普通瓊脂平板、普通肉湯培養(yǎng)基及SS培養(yǎng)基，均由伊犁職業(yè)技術學院中心實驗室配制;藥敏紙片，購自杭州微生物試劑有限公司和北京天壇藥物生物技術開發(fā)公司;O1～O163抗原標準血清(國藥準字為S1082009，批號為20050301)，購自中國生物技術集團公司蘭州生物制品研究所。
3．1．3主要儀器ATB細菌分析儀，購自法國生物梅里埃公司。
3．2方法
3．2．1病料的采集病料為患大腸桿菌病的仔豬的心臟、肝臟、脾臟、腸內(nèi)容物及糞便，采自伊寧市南郊的某豬場。
3．2．2病原的分離及純化無菌采集病豬的十二指腸內(nèi)容物及肝臟等組織，接種在普通瓊脂平板及普通肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，涂片，革蘭染色鏡檢。參照參考文獻［1］中的方法挑取表面光滑、邊緣整齊、灰白色、半透明的單個小菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板和鮮血培養(yǎng)基上，于37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。
3．2．3染色鏡檢挑取單個菌落進行革蘭染色，在光學顯微鏡下觀察細菌的形態(tài)特點。
3．2．4細菌鑒定1)細菌鑒定前準備。參照法國生物梅里埃公司的ATB細菌分析儀說明書。2)接種物的準備。打開生理鹽水基物安剖管(2mL)。取1個大腸桿菌菌落，制備混濁度相當于0．5McFarland的菌懸液，用ATB比濁管測量。3)試驗條的接種。取1個大腸桿菌菌落接種到含2mL生理鹽水基物安剖管中，混合均勻，并將混合物接到試驗條的每支小管內(nèi)，用ATB微量吸管定量接入55μL/管。用2滴礦物油覆蓋鳥氨酸脫羧酶(ODC)、精氨酸雙水解酶(ADH)、賴氨酸脫羧酶(LDC)、脲酶(UＲE)、L－阿拉伯糖醇(LAＲL)、半乳糖酸鹽(GAT)、5－酮葡萄糖酸(5KG)，試驗條蓋上蓋子，于37℃條件下需氧培養(yǎng)24h。
3．2．5致病性試驗取小白鼠4只，分成2組，2只/組，試驗組腹腔注射大腸桿菌增菌培養(yǎng)液，0．3mL/只;對照組腹腔注射生理鹽水，0．3mL/只，觀察發(fā)病情況。取發(fā)病與病死小白鼠心血及肝臟、脾臟進行細菌分離鑒定。
3．2．6血清學鑒定參照參考文獻［2－3］中的方法進行血清學鑒定。將待檢菌株接種于營養(yǎng)斜面上，于37℃培養(yǎng)24h，用無菌生理鹽水制成濃菌液，然后進行玻片凝集試驗以確定O血清型。
3．2．7藥敏試驗分別從麥康凱瓊脂平板、普通瓊脂平板、鮮血培養(yǎng)基中挑取大腸桿菌菌落接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)24h后分別取少量菌液接種在3個普通瓊脂平板上。在1號普通瓊脂平板中按順序依次接入丙氟派酸、羧芐青霉素、氯霉素、痢特靈、慶大霉素、呱拉西林和克林霉素，在2號普通瓊脂平板中按順序依次接入卡那霉素、阿莫西林、氨芐西林、氟派酸、頭孢噻吩、羅紅霉素、磺胺甲基異唑和奧格門丁，在3號普通瓊脂平板中按順序依次接入阿奇霉素、奧復星、磺胺異唑、強力霉素、培氟沙星和阿米卡星。放好藥敏紙片后于37℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察并記錄結(jié)果，以抑菌圈直徑大小進行強度判斷:≥7～＜10mm為低度敏感，≥10～＜15mm為中度敏感，≥16mm為高度敏感。
4結(jié)果與分析
4．1病原的分離及染色鏡檢結(jié)果
經(jīng)24h培養(yǎng)后，試管內(nèi)液體混濁，試管上部長有菌膜，管底有白色沉淀。
取少量菌液進行革蘭染色，涂片鏡檢可見大量散在或成對的、無芽孢、兩端鈍圓的直桿菌，以及著色陰性和少量革蘭陽性球菌、雙球菌。肝臟觸片檢查發(fā)現(xiàn)，大量的被疑為腐敗梭菌的革蘭陽性長桿菌，增菌培養(yǎng)后未檢出。
取少量菌液劃線接種于普通瓊脂平板上，培養(yǎng)后可見邊緣整齊、光滑、濕潤、中央突起、呈乳白色中等偏大的菌落;但菌落底部有一層菌膜，疑為變形桿菌攙雜所致。
為了排除變形桿菌的影響，挑取疑似菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，于37℃培養(yǎng)24h后可見圓整、表面凸起、紅色的濕潤菌落。
另取疑似菌落分別劃線接種于SS培養(yǎng)基和鮮血培養(yǎng)基中，結(jié)果在SS培養(yǎng)基上生長貧瘠，呈紅色;在鮮血培養(yǎng)基上呈β溶血。
4．2生化試驗及細菌測定結(jié)果
加入1滴James試劑，應用ATB細菌分析儀進行鑒定，閱讀器自動記錄培養(yǎng)基測定小管的顏色反應，并根據(jù)生化反應表記錄結(jié)果。生化反應顯示:ODC(+)、ADH(–)、LDC(+)、UＲE(－)、LAＲL(－)、GAT(+)、5KG(－)、LIP(－)、ＲP(+)、BGLU(－)、MAN(+)、MAL(+)、IND(－)、BNAG(－)、BGAL(+)、GLU(+)、SAC(－)、LAＲA(－)、DAＲL(－)、aGLU(－)、aGAL(+)、TＲE(+)、ＲHA(+)、INO(－)、ADO(－)、PLE(－)、BGUＲ(+)、CEL(－)、SOＲ(－)、aMAL(－)、MNT(－)、ASPA(－)。綜合生化反應的結(jié)果，將樣品判定為大腸桿菌。
4．3致病性菌株的O血清型鑒定結(jié)果
用大腸桿菌抗O抗原單價血清對分離菌株進行玻板凝集試驗鑒定血清型，結(jié)果為O138型。
4．4致病性試驗結(jié)果
試驗組小白鼠均在48h內(nèi)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，起初比較興奮，之后精神沉郁，但未見死亡。解剖小白鼠，取其肺臟組織用鮮血培養(yǎng)基培養(yǎng)，結(jié)果得到的菌落形態(tài)同原菌落，挑取單個菌落進行生化試驗符合上述生化反應結(jié)果。涂片，鏡檢，細菌形態(tài)也同原細菌。對照組小白鼠均健活。
4．5藥敏試驗(結(jié)果見表1)
由表1可知:該菌株對痢特靈、慶大霉素、阿奇霉素、頭孢噻吩及奧格門丁具有高敏感性;對強力霉素及磺胺類藥物具有中度敏感性;而對羧芐青霉素等已經(jīng)產(chǎn)生了耐藥性。
5治療
1)選用對此菌株高敏感性的藥物對仔豬進行治療，肌肉注射痢特靈、阿奇霉素、頭孢噻吩及奧格門丁注射液，2次/d。同時補液(10%安鈉咖5mL、2．5%維生素B13mL、10%維生素C5mL、1%硫酸阿托品2mL、5%葡萄糖100mL、生理鹽水85mL，混合即得)，混合液用前需加溫至39℃，每頭仔豬每日腹腔注射5mL。
2)對腹瀉癥狀較輕的仔豬，用0．1%亞硒酸鈉、0．05%痢菌凈和0．1%高錳酸鉀溶液以1∶1∶1比例混合飲用，1～2d即可治愈。
3)稱取氯化鈉3．5g、碳酸氫鈉2．5g、氯化鉀1．5g、葡萄糖20g、氟哌酸散4g，加溫水1000mL溶解，每日早晚各灌服1次，每次80～100mL，也可起到一定作用。
6小結(jié)
1)該種豬場仔豬發(fā)病的大部分原因是飼養(yǎng)管理不當。圈舍內(nèi)通風不良，應安裝大功率的電風扇來保持圈舍內(nèi)空氣干燥，溫度適宜。此外，由于死畜的處理不當造成地下水被污染，豬的飲用水一定要消毒，否則易引起仔豬發(fā)病。
2)豬場內(nèi)的工作人員要經(jīng)過嚴格的培訓，無行醫(yī)資格的人員不能隨意治療病畜。不可長期使用一種藥物，該場用藥比較單一，并且大劑量使用青霉素、鏈霉素，造成了耐藥性。藥物應用應遵循以下原則:選擇敏感性強的藥物，要早用藥、藥量足、療程短;制訂完整的豬群藥物保健計劃，仔豬在出現(xiàn)斷奶、轉(zhuǎn)群或者其他應激時，除在飼料中添加抗菌藥物外，還應加入多種維生素、微量元素等。在生產(chǎn)過程中，豬場應對藥物進行藥效觀察和篩選，選擇性地對母豬進行投藥。種母豬產(chǎn)前、產(chǎn)后各喂1周，種公豬每月喂1周。
3)試驗小白鼠沒有死亡可能是由于致病性O138抗原顯弱陽性，毒力不強，或是由于O1～O163抗原標準血清存放時間過長所致。
4)國內(nèi)外對預防仔豬大腸桿菌病的各種類型疫苗研究取得了一定進展，血清型鑒定結(jié)果顯示，大腸桿菌多致病血清型的存在給防制工作增加了難度。而優(yōu)勢血清型的確定，可用相應血清型制備疫苗，并為最大限度地控制該病提供了條件。因此，定期對豬場的大腸桿菌進行分離鑒定，選用具有針對性的菌株作為抗原制備菌苗，配以敏感藥物治療和良好的衛(wèi)生措施，才能收到較好效果。
(伊犁職業(yè)技術學院，王傳鋒，胡常紅，比爾來西肯)
