禽白血病是由禽白血病病毒（avianleucosisvirus，ALV）引起的家禽多種腫瘤性疾病的總稱，主要以造血細胞惡性增生為特征的一類傳染病，包括淋巴細胞性白血病、成紅細胞性白血病、成髓細胞性白血病、骨髓細胞瘤等。血管瘤型禽白血病是由ALV引起的腫瘤性疾病之一，屬于內(nèi)皮性腫瘤，多為血管內(nèi)皮細胞增生形成。血管瘤易發(fā)于患雞皮膚或內(nèi)臟器官的表面，血管瘤破裂后引起流血不止，患病雞常死于大量失血。2014年筆者通過對某養(yǎng)殖戶以血管瘤為臨床特征的患雞進行病理學觀察和病原核酸檢測，診斷為血管瘤型禽白血病。
1材料
1.1病料來源某養(yǎng)殖戶10羽病死雞。
1.2試劑
分子生物學試劑（SDS、蛋白酶K、酚/氯仿/異戊醇、dNTPs、TagDNA聚合酶、200bpDNAMarker等）購自上海生物工程技術(shù)有限公司；酒精、二甲苯、石蠟等。
2內(nèi)容與方法
2.1病理學觀察
選擇病變組織及與病變組織交界部位，使用梯度濃度乙醇溶液脫水，將脫水組織浸入二甲苯透明，移入液化石蠟內(nèi)浸漬，將組織移入包埋框內(nèi)，倒入石蠟，包埋，切片；石蠟切片蘇木素-伊紅染色后，顯微鏡觀察。
2.2禽白血病病原核酸鑒定
2.2.1使用引物參照金志強等文獻，合成內(nèi)外兩對引物，見表1。以單管巢式PCR方法檢測病料外源性禽白血病病毒核酸。
2.2.2PCR擴增取病料總DNA樣本1～2μL作為模板，分別加入10×PCRbuffer1μL、25mMMg-Cl23μL、dNTP（10mM）1μL、TaqE（2.5u）1μL、LTR1+LTR2（20mM）各0.5μL，添加ddH2O補足反應體積為10μL。第一次擴增進行15個循環(huán)，然后在同一反應管中加入10×PCRbuffer4μl、LTR3+LTR4（20mM）各1μl，添加ddH2O補足反應體積為50μl；第二次擴增進行35個循環(huán)。PCR反應按下列條件進行：94℃預變性5min、94℃變性20s、60℃退火40s、72℃延伸1min，最后72℃再延伸10min。PCR擴增完成以后，取5μl擴增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。
3結(jié)果與分析
3.1剖檢病變發(fā)病雞主要表現(xiàn)為雞皮膚表面、胸部皮膚出現(xiàn)血皰，血皰破裂后流血，有些破潰已結(jié)痂。部分患雞肝表面可見多個凸起的血皰。見圖1-圖2。
3.2病理組織學觀察從病例切片中可以看到發(fā)生血皰的組織細胞之間含有大量紅細胞，腎臟腎小管與腎小管之間出現(xiàn)淋巴細胞，腎間質(zhì)中存在數(shù)量不等的紅細胞。見圖3。
3.3單管巢式PCR方法檢測LTR基因在被檢的10份病料中，8份擴增出一條213bp的DNA帶，與預期擴增長度相符合，外源性禽白血病病毒的檢出率達80%（8/10）。
4體會與討論
1）從雞分離的禽白血病病毒有A、B、C、D、E、J六個亞群。其中A、B、C、D屬于外源性ALV；E亞群為廣泛存在、沒有致病性的內(nèi)源性病毒，參考金志強等方法合成的引物，直接檢測出了外源性禽白血病病毒，為快速診斷禽白血病病毒提供了快捷的方法。
2）血管瘤是由禽白血病病毒引起禽白血病的一種臨床表現(xiàn)形式，感染禽白血病的雞群呈漸進性發(fā)生和持續(xù)性的死亡，蛋雞群產(chǎn)蛋率下降。通過剖檢病變、組織學觀察、病原核酸檢測，確診該次疫病為外源性禽白血病病毒引起的血管瘤型禽白血病。
(VeterinaryServiceCenterofPenghu,hediagnosisofhemangiomatypeofavianleukosisChenyie)
