豬圓環(huán)病毒病在臨床上以斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征為主要特征，并能引發(fā)多種豬病，給養(yǎng)豬業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。近日某養(yǎng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)40~60日齡仔豬75頭，連續(xù)幾天內(nèi)有23頭仔豬發(fā)病，其中6頭死亡，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、剖檢病變及實(shí)驗(yàn)室檢查，確診為圓環(huán)病毒病，現(xiàn)將診治情況報(bào)道如下。
1發(fā)病情況
2014年5月20日某養(yǎng)豬場(chǎng)23頭40~60日齡的仔豬接連發(fā)病，表現(xiàn)為發(fā)熱、精神沉郁、食欲不振，有些表現(xiàn)為腹瀉、呼吸急促、咳嗽、結(jié)膜炎等。畜主起初按感冒用藥，用藥兩天癥狀有所緩解，一旦停藥又復(fù)發(fā)。經(jīng)問(wèn)診調(diào)查得知該場(chǎng)仔豬14日齡口服仔豬副傷寒疫苗，25日齡注射豬瘟、豬丹毒和豬肺疫三聯(lián)疫苗。
2臨床癥狀
病豬發(fā)熱，體溫高達(dá)40～41℃，精神沉郁，食欲不振，被毛粗亂，皮膚蒼白，伴有黃疸，有的在耳部、腹部可見(jiàn)出血性紫紅色斑塊；部分病豬有神經(jīng)癥狀，呈現(xiàn)肌肉震顫，關(guān)節(jié)腫脹，站立不穩(wěn)，四肢呈劃水狀。隨著病情的發(fā)展，病豬眼圈發(fā)紫，耳朵發(fā)青，身體發(fā)紺，最后窒息死亡。
3剖檢變化
病程較長(zhǎng)的豬解剖后可見(jiàn)全身淋巴結(jié)特別腫大，呈白色、紅色和紫色等，切面硬度增大、壞死，有的出血；脾臟腫大、出血、邊緣有出血性梗死及丘狀突起，肉樣變；腎臟腫大，切面外翻，條紋狀出血，表面顏色不一，有土黃色、紫紅色，散布有出血點(diǎn)、壞死灶；肺腫大，呈彌漫性間質(zhì)性肺炎，有的呈纖維素性肺炎，胸腔有淡黃色積液；肝臟質(zhì)脆，表面有灰白色壞死灶；心包積液，有纖維素性心包炎。
4實(shí)驗(yàn)室診斷
4.1染色鏡檢
無(wú)菌采取病死豬淋巴結(jié)、肝、脾、肺等病料，涂片后革蘭氏和瑞氏染色，顯微鏡檢查未見(jiàn)致病性細(xì)菌。
4.2細(xì)菌培養(yǎng)
無(wú)菌采集病死豬淋巴結(jié)、肺、肝、脾等病料，將病料分別接種于麥康凱、瓊脂培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24～48h，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。
4.3豬圓環(huán)病毒病的PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）診斷
4.3.1試驗(yàn)材料
豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。儀器：分析天平、水浴鍋、臺(tái)式高速離心機(jī)、真空干燥器、PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析儀）、液氮或-70℃冰箱、微波爐、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL），均由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究室提供。耗材：眼科剪、眼科鑷、稱量紙、20mL一次性注射器、1.5mL滅菌離心管、瓊脂糖、500mL量筒、500mL錐形瓶、吸頭（10μL、200μL、1000μL）、滅菌雙蒸水，均由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究室提供。
4.3.2樣品制備
（1）樣品采集。取病死豬有明顯病變臟器的病變部與健康部交界處組織；待檢活豬，用注射器采血5mL。2～8℃保存，送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。
（2）樣品處理。每份樣品分別處理。
①組織樣品處理。稱取待檢病料0.1g置組織研磨器中剪碎并研磨，加入1.5mLpH7.2的PBS或生理鹽水繼續(xù)研磨。取已研磨好的待檢組織液，置1.5mL滅菌離心管中，8000r/min離心5min，取上清液100μL，再加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混勻后，置55℃水浴中過(guò)夜。
②全血樣品處理。待血凝后取血清放于離心管中，8000r/min離心5min，取血清100μL，加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混勻后，置55℃水浴中過(guò)夜。
③陽(yáng)性對(duì)照處理。將試劑盒中陽(yáng)性樣品混勻后取100μL，加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混勻后，置55℃水浴中過(guò)夜。
④陰性對(duì)照處理。取滅菌去離子水100μL，加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混勻后，置55℃水浴中過(guò)夜。
4.3.3操作步驟
（1）病毒模板DNA的提?。?/div>
①?gòu)乃″佒腥〕鲆烟幚淼臉悠?、陰性?duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，分別加入600μL酚/氯仿/異戊醇混合液（用該液之前不要晃動(dòng)，不要吸到該液上層保護(hù)液），用力顛倒10次混勻，12000r/min離心10min。
②取500μL上清液置于滅菌離心管中，加入500μL異丙醇，混勻，置液氮中3min或-70℃冰箱中30min。取出樣品管，室溫融化，13000r/min離心15min。
③棄上清液，沿管壁緩緩滴入1mL70%乙醇，輕輕旋轉(zhuǎn)1周后倒掉，將離心管倒扣于吸水紙上1min，再將離心管真空抽干15min或50℃烘干（以無(wú)乙醇味為準(zhǔn)）。
④取出樣品管，用30μL滅菌去離子水溶解沉淀，作為模板備用。
（2）PCR擴(kuò)增：每份總體積20μL，取16μLPCR反應(yīng)液（用前混勻），2μLTaqDNA聚合酶，2μL模板DNA（見(jiàn)4.3.3中④），混勻，作好標(biāo)記。擴(kuò)增條件為94℃3min后，94℃30s，62℃45s，72℃45s，循環(huán)35次，72℃延伸10min。
（3）電泳：稱2g瓊脂糖放于500mL錐形瓶中，加入50倍稀釋的TAE電泳緩沖液200mL（即取4mL50倍TAE液用雙蒸水稀釋至200mL），于微波爐中熔解，再加入10μL染色液混勻。在電泳槽內(nèi)放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物15μL混合3μL上樣緩沖液，點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中，以110～120V電壓于50倍稀釋的TAE電泳緩沖液中電泳，紫外燈下觀察結(jié)果。
4.3.4結(jié)果判定
PCV2陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)1154bp擴(kuò)增帶、陰性對(duì)照無(wú)帶出現(xiàn)（引物帶除外）時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)1154bp擴(kuò)增帶為PCV2陽(yáng)性，否則為陰性。結(jié)果3、4、5號(hào)被檢樣品在1154bp出現(xiàn)擴(kuò)增帶，診斷為豬圓環(huán)病毒?。▓D1）。
5防治
此病的預(yù)防，目前還沒(méi)有比較有效的方法，大多強(qiáng)調(diào)加強(qiáng)衛(wèi)生和飼養(yǎng)管理，倡導(dǎo)全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式。
5.1預(yù)防基本原則
本病發(fā)生的特點(diǎn)是豬群一旦侵入PCV2就可能增加其他病原協(xié)同感染的幾率，并最終導(dǎo)致臨床發(fā)病。因此，對(duì)繼發(fā)其他傳染病的防控尤為重要，及早發(fā)現(xiàn)、有效隔離和盡可能控制本病橫向傳染也是非常重要的。建立豬場(chǎng)完善的生物安全體系，將消毒工作貫穿于養(yǎng)豬生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，減少或杜絕豬群繼發(fā)感染的幾率；科學(xué)的飼養(yǎng)與管理，保持舍內(nèi)良好的環(huán)境衛(wèi)生，提高豬群的抵抗力。
5.2藥物防治
制定群體藥物預(yù)防方案，控制豬群的細(xì)菌性繼發(fā)感染，是目前規(guī)?；i場(chǎng)的常規(guī)技術(shù)。對(duì)有臨床癥狀的豬進(jìn)行隔離治療，實(shí)行對(duì)癥療法：1）5%葡萄糖生理鹽水、頭孢拉定、地塞米松（按說(shuō)明書治療劑量使用）混合靜注；2）抗病毒多肽，肌肉注射，每天1次，連用7d；3）對(duì)于高熱不退的豬應(yīng)配合復(fù)方柴胡注射液，肌肉注射，每天1次，連用3d。采取以上措施后豬場(chǎng)疫情得到了很好的控制，未增加新發(fā)病豬和死亡豬。
（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，武守艷，陳劍波，楊麗華，董春光，韓文儒，夏艷婷，韓一超）
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